Проблема заболеваемости и смертности от злокачественных новообразований – одна из наиболее актуальных в современной медицине. На сегодняшний день колоректальный рак, рак простаты и молочной железы в совокупности составляют подавляющее большинство злокачественных новообразований у населения РФ. Среди женского населения рак молочной железы и колоректальный рак суммарно занимают первое место по встречаемости, у мужского населения на рак простаты и колоректальный рак приходится 22,9 % всех злокачественных заболеваний, суммарно они находятся на первом месте среди всех новообразований [3]. Смертность от этих заболеваний напрямую связана с ранним метастазированием и развитием рецидивов.
Развитие современных технологий сделало возможным определение единичных опухолевых клеток в биоптатах костного мозга и периферической крови [4]. Циркулирующие опухолевые клетки (CTCs) происходят из клонов первичной опухоли и представляют собой клетки эпителиального происхождения, которые определяются в периферической крови больных с различными формами солидного рака [5]. В экспериментальных моделях было установлено, что ежедневно в кровоток из 1 г опухолевой ткани поступает 1 млн клеток, при этом только 1 клетка из 40 может достигнуть преметастатической ниши и только 0,01 % клеток реализуются в гематогенные метастазы [2]. Наиболее полно изучены количественны значения циркулирующих опухолевых клеток у больных раком молочной железы, где их в крови у больных ранним (N0) раком молочной железы обнаруживаются в 30 % случаев, у больных местнораспространенным (N+) раком – в 36 %, у больных метастатическим раком – в 70 % случаев [7].
До настоящего времени основными методами выявления CTCs были иммуноцитологические (иммуноцитохимический, проточная цитометрия и EPISPOT) и молекулярно-биологические (RT-PCR) методы [1]. Нами на практике апробирована система детекции циркулирующих опухолевых клеток CellSearch™ Veridex, Johnson & Johnson, США.
Материалы и методы исследования
В исследование были включены 15 больных раком молочной железы от 34 до73 лет II стадии заболевания до и после хирургического лечения, 8 больных раком толстой кишки T3NxM0 в возрасте от 53 до 81 года до оперативного вмешательства и 7 больных раком предстательной железы в возрасте от 58 до 87 лет после проведения гормональной и лучевой терапии, у которых диагностированы дистантные метастазы в печень и кости.
Кровь в объёме 8-10 мл забиралась в пробирки СellSave Preservative Tube, содержащие антикоагулянт ЭДТА, а также реагент для сохранения жизнеспособности опухолевых клеток. Для отделения клеток крови и опухолевых от плазмы кровь смешивалась с рабочим буфером из набора реагентов CellSearch® СТС kit и центрифугировалась при ускорении 800g в течение 10 минут. После этого образцы переносились в аппарат CellTracks® AutoPrep® System, который в автоматическом режиме, удаляя плазму крови и форменные элементы, иммуномагнитно обогащал образец микрочастицами железа, покрытыми антителами к маркёрам адгезии эпителиальных клеток EpCAM, CD45 и цитокератинам 8,18,19. Качество работы системы оценивали с использованием стандартного контроля СТС control kit. Материал сканировался в анализаторе CellTracks® Analyzer II®. С учетом морфологических характеристик и экспрессии маркеров регистрировались циркулирующие опухолевые клетки. Общее число выявленных опухолевых клеток являлось конечным результатом.
Результаты исследования и их обсуждение
У больных раком молочной железы II стадии единичные CTCs были обнаружены в 47 % случаев (у 7 из 15 больных), при этом их количество ни в одном из случаев не достигло порога позитивности, составляющего для рака молочной железы 5 опухолевых клеток в исследуемом образце крови. Так, количество опухолевых клеток в исследуемой группе колебалось от 1 до 4 клеток в 7,5 мл исследуемого образца крови, максимальное количество опухолевых клеток (4 клетки) в нашем исследовании было зарегистрировано у 1 больной (в 6,7 % случаев), в 13,3 % (у 2 больных) случаев мы обнаружили единичную опухолевую клетку в образце, в 20 % случаев всех исследованных образцов крови (у 3 больных) выявлялось по 2 клетки и в 6,7 % (у 1 больной) определялось 3 CTCs в 7,5мл периферической крови. Нами также отмечена тенденция к повышению количества опухолевых клеток после проведения радикального оперативного вмешательства с 1 до 4 клеток, вероятно связанная с травматичностью хирургического вмешательства и как следствие, выходу в кровяное русло единичных опухолевых клеток.
У 7 из 8 исследованных больных раком толстой кишки III стадии мы не обнаружили циркулирующие опухолевые клетки в периферической крови, и только у одной больной была выявлена единичная опухолевая клетка, но и этот образец мы расценили как отрицательный, т.к. не был превышен порог рефересных значений в 3 клетки для рака толстой кишки.
Больной С., 1955 г.р. Диагноз: рак предстательной железы, st III, состояние после гормональной и лучевой терапии, метастазы в печень. В 2009 г. диагностирован рак предстательной железы, г/а G2 светлоклеточная аденокарцинома. В 2013 г. была биопсия образования печени, г/а ИГХ – mts солидного рака предстательной железы. Исследование периферической крови выявило 190 CTCs. Опухолевые клетки гетерогенны по морфологическим характеристикам, имеют иммунофенотип CD45-CD8+CD18/19+
Из 7 больных раком предстательной железы с диагностированными метастазами в кости и печень в 57 % случаев были выявлены CTCs в периферической крови (у 4 из 7 больных). При этом у 2-х больных мы наблюдали не больше 3-х опухолевых клеток, что не превысило порога позитивности для рака предстательной железы в 5 CTCs в 7,5 мл периферической крови. У одного больного с диагностированными метастазами в кости мы обнаружили 37 опухолевых клеток, и у больного с метастазами в печень их количество в исследованном образце крови составило 190 CTCs (рис.1). Отсутствие CTCs в периферической крови у исследованных больных, а также значения их ниже референсных, вероятно, связаны с эффективностью проводимого гормонального и лучевого лечения.
Заключение. Таким образом, проведенное исследование показало, что при II стадии рака молочной железы ни в одном случае количество циркулирующих опухолевых клеток в периферической крови не достигло порога позитивности, однако после хирургического лечения у 13 % больных отмечена тенденция к повышению количества циркулирующих опухолевых клеток, что вероятно связано либо с травматичностью хирургического вмешательства, либо со стрессовой реакцией организма на лечение и выбросом в кровяное русло опухолевых клеток, которые, возможно, до этого были в состоянии покоя. Мы предполагаем, что при начальных стадиях заболевания порог позитивности определения циркулирующих опухолевых клеток, в частности при раке молочной железы, может быть снижен до 3-4 клеток, что в дальнейшем может служить маркером опухолевой прогрессии, и потребует более тщательного наблюдение больных.
Что касается исследования больных первичным раком толстой кишки III стадии, у 88 % пациентов мы не обнаружили в крови CTCs, что не противоречит данным зарубежной литературы [6], свидетельствующей о наличии этих клеток только при дистантных метастазах. При раке предстательной железы с диагностированными метастазами в кости и печень после лечения в 57 % случаев были выявлены CTCs в периферической крови, что, возможно, связано с не эффективностью проводимого лечения и требует изменения тактики лечения и более тщательно наблюдения больных.
Таким образом, проведенное исследование, направленное на обнаружение CTCs в крови больных раком молочной железы, предстательной железы и толстой кишки может служить маркером распространенности опухолевого процесса и оценки эффективности проводимого лечения, а также индикатором активности опухолевого процесса и его стабилизации, даже при наличии дистантных метастазов. Исследования, направленные на количественную оценку CTCs как фактора прогноза течения заболевания и его связи с морфологическими, клиническими и прогностическими характеристиками, а также оценку эффективности проводимого противоопухолевого лечения на разных этапах будут продолжены.
Библиографическая ссылка
Кит О.И., Новикова И.А., Бахтин А.В., Никипелова Е.А., Шатова Ю.С., Габараева В.М., Нистратова О.В. ПЕРВЫЙ ОПЫТ ДЕТЕКЦИИ ЦИРКУЛИРУЮЩИХ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК В ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ // Международный журнал экспериментального образования. – 2013. – № 11-2. – С. 37-39;URL: https://expeducation.ru/ru/article/view?id=4312 (дата обращения: 24.04.2024).