Для получения больших обзорных снимков продольных и поперечных срезов спинного мозга (СМ) мелких лабораторных грызунов использовали классическую спиртовую проводку материала для последующего заключения в парафин или в эпоксидную смолу. Материал при обеих проводках фиксировали перфузией промывающим физиологическим раствором, а затем 4 % раствором параформальдегида при температуре 4 °С [Павлович с соавт., 2012]. Для парафиновой проводки использовали в качестве дегидратирующей жидкости изопропиловый спирт [Коржевский, Гиляров, 2010], а для заключения в аралдит дегидратировали материал в этанолах возрастающей концентрации и окиси пропилена [Павлович с соавт., 2013]. В качестве объекта исследования использовали интактных половозрелых крыс линии Спрег-Доули обоего пола или половозрелых линейных мышей. Животных усыпляли наркозом и перфузировали растворами через сердце. Дополнительно фиксировали СМ, после его выделения из спиномозгового канала в 1 % растворе четырех окиси осмия для сохранения миелина перед заключением в эпоксидную смолу. Куски спинного мозга были длиной 1,5 – 2,0 сантиметра. Заключали весь СМ, порезанный на куски одинаковой длины в ряд парафиновых блоков или ряд капсул с эпоксидной смолой для последующего получения продольных или поперечных срезов. Срезы, заключенные в парафин, резали на микротоме (их толщина была 5-10 мкм). Препараты окрашивали гематоксилин-эозином или модифицированным методом Клювера-Баррера с применением люксолевого синего. Полутонкие срезы получали на ультратоме с микронной подачей (ЛКБ, Швеция) и окрашивали толуидиновым синим и/или пиронином. При традиционной окраске поперечных парафиновых срезов СМ в нем хорошо выявлялось серое и белое вещество. В последнем наблюдали отек миелиновых нервных волокон с характерной фрагментацией миелина, которую не устранял люксолевый синий. При поперечной резке полутонких срезов хорошо видно, что окись осмия не проходит в ткань СМ на всю глубину, а фиксирует материал нервной ткани лишь на 0,3 мм по его окружности, где наблюдается сохранная структура миелиновой оболочки в волокнах разного размера. В участках, куда не прошла четырехокись осмия наблюдаются деструктивные изменения миелина [Павлович, Просвирнин, 2013]. Нейроны и глия серого вещества СМ хорошо выявлялись как на парафиновых срезах, так и на срезах СМ, заключенного в аралдит. Преимуществом парафиновых срезов является возможность применения для окраски любых водорастворимых красителей, а преимуществом полутонких срезов является хорошее разрешение препаратов и возможность последующего использования этой же ткани для электронной микроскопии. Парафиновые срезы позволяют получать обзорные снимки с кусков значительно большего размера, чем полутонкие срезы, что хорошо для исследования значительных объемов ткани, особенно у экспериментальных животных (травма, перерезка СМ). Таким образом оба подхода имеют свои плюсы и минусы и дополняют друг друга при проведении реконструкции ткани СМ в норме и экспериментах [Рябов с соавт., 2013; 2014].
Библиографическая ссылка
Павлович Е.Р., Рябов С.И., Просвирнин А.В., Автаева Ю.Н., Сироткин В.Н. ИСПОЛЬЗОВАНИЕ РАЗЛИЧНЫХ МЕТОДОВ СВЕТООПТИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ СПИННОГО МОЗГА: ПЛЮСЫ И МИНУСЫ ПАРАФИНОВОЙ ЗАЛИВКИ МАТЕРИАЛА ПО СРАВНЕНИЮ С ЕГО ЗАКЛЮЧЕНИЕМ В ЭПОКСИДНЫЕ СМОЛЫ // Международный журнал экспериментального образования. – 2015. – № 9. – С. 133-133;URL: https://expeducation.ru/ru/article/view?id=8257 (дата обращения: 18.04.2024).